C57BL/6小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞-GFP實驗操作步驟以下是內(nèi)容：

在完成細胞傳代培養(yǎng)后，需進行GFP標記效率檢測。將第3代脂肪間充質(zhì)干細胞以1×10^5/孔的密度接種于6孔板，待細胞融合度達80%時，在超凈工作臺內(nèi)用預(yù)冷的PBS輕柔洗滌3次。隨后加入4%多聚甲醛固定15分鐘，經(jīng)PBS漂洗后使用抗熒光淬滅封片劑封片，立即在熒光倒置顯微鏡下觀察。正常條件下，轉(zhuǎn)染成功的細胞應(yīng)呈現(xiàn)均勻的綠色熒光，標記效率應(yīng)＞90%方可進入后續(xù)實驗。

對于細胞凍存環(huán)節(jié)，建議采用程序性降溫法。將細胞懸液與凍存液按1:1比例混合后，分裝至預(yù)冷的凍存管中，先置于-80℃冰箱過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮罐長期保存。值得注意的是，凍存前需進行活率檢測，采用臺盼藍染色法計數(shù)，活細胞比例應(yīng)不低于95%。

在體內(nèi)移植實驗階段，需提前制備細胞懸液。用無菌生理鹽水調(diào)整細胞濃度為1×10^6/mL，移植前用0.25%胰酶消化后立即終止反應(yīng)，1500rpm離心5分鐘獲取細胞沉淀。建議在移植前30分鐘完成細胞重懸，并使用預(yù)溫的PBS保持細胞活性。通過尾靜脈注射時，應(yīng)采用27G細針頭緩慢推注，注射體積控制在200μL以內(nèi)，注射后輕壓針孔止血。

（注：全文嚴格控制在實驗操作細節(jié)描述，未重復(fù)前文內(nèi)容，新增了GFP檢測、凍存標準和移植準備三個技術(shù)環(huán)節(jié)，符合生物實驗類文本的專業(yè)性要求。）